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Percoll细胞www.3499.com(Pharmacia)

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产品名称: Percoll细胞www.3499.com(Pharmacia)
产品型号: 17-0891-01
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简单介绍

Percoll细胞www.3499.com(Pharmacia)产品名称:Percoll细胞www.3499.com(Pharmacia) 17-0891-01 英文名称: Percoll 产品货号: 17-0891-01 产品规格: 100ML 1L 试剂级别: 试剂级 产品产地: USA 产品商标: Pharmacia


Percoll细胞www.3499.com(Pharmacia)  的详细介绍

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Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化**细胞和**母细胞
(一)原理
Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、**及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
(二)操作方法及注意事项
1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
Percoll浓度(%)  70       60      50      40       30    20
比重g/ml           1.090      1.077      1.067    1.056     1.043     1.031
 2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
 3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
 4.离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
 5.取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。


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